fermer
Choisissez votre site
Mondial
Réseaux sociaux
Vues: 5210 Auteur: Éditeur de site Temps de publication: 2025-06-19 Origine: Site
Un spectrophotomètre vous permet Mesurez la quantité de lumière qu'un échantillon absorbe à une certaine longueur d'onde. Lorsque vous utilisez la spectrophotométrie, vous acquérez des compétences qui aident dans de nombreux domaines scientifiques. Ce guide rend la spectroscopie simple en vous montrant comment utiliser les outils d'enseignement et les expériences réelles. Vous verrez que l'enseignement avec un spectrophotomètre soutient Résultats précis , tests non destructifs et apprentissage de spectroscopie pratique. L'enseignement aux compétences de spectroscopie des élèves vous aide à explorer la chimie, les sciences de l'environnement, etc. La spectrophotométrie et la spectroscopie jouent toutes deux des rôles clés dans l'enseignement des bases scientifiques.
Un spectrophotomètre mesure la quantité de lumière qu'un échantillon absorbe, vous aidant à trouver des concentrations chimiques facilement et avec précision.
La configuration, l'étalonnage et la préparation des échantillons appropriés sont essentiels pour obtenir des résultats fiables et cohérents de votre spectrophotomètre.
Utilisez des cuvettes propres et effacées et gérez-les soigneusement pour éviter les erreurs causées par les empreintes digitales ou les rayures.
Suivez les règles de sécurité comme porter des lunettes et des gants et gardez votre espace de travail propre pour vous protéger et protéger vos données.
Apprenez à lire attentivement les valeurs d'absorbance et les spectres, vérifiez les courbes lisses et les pics attendus et résoudre les problèmes courants pour améliorer vos expériences.
La spectrophotométrie est une méthode que vous utilisez Mesurez la quantité de substance de lumière . Lorsque vous brillez la lumière à travers une solution, une partie de la lumière passe et certaines sont absorbées par les molécules à l'intérieur. Ce processus vous aide à découvrir la quantité de produits chimiques présents. La spectrophotométrie fonctionne avec différents types de lumière, y compris les UV-vis et l'infrarouge. Vous pouvez l'utiliser pour étudier beaucoup de choses, comme la quantité de sucre dans une boisson ou la concentration d'un médicament. L'idée principale est simple: plus les molécules absorbent la lumière, moins la lumière sort de l'autre côté.
La spectrophotométrie vous donne un moyen de collecter des données quantitatives. Par exemple, vous pouvez Mesurer les concentrations des microgrammes aux grammes par décilitre . Cela le rend utile dans la chimie, la biologie et même les laboratoires cliniques.
Un spectrophotomètre est l'outil que vous utilisez pour le spectrophotométrie. Il brille la lumière à une longueur d'onde spécifique à travers votre échantillon. À l'intérieur de l'instrument, vous trouvez un Source lumineuse, un monochromateur pour choisir la bonne longueur d'onde, une cuvette pour maintenir votre échantillon et un détecteur pour mesurer la quantité de lumière passe. Le détecteur vous montre la quantité de lumière que l'échantillon absorbe. Si votre échantillon a un chromophore, il absorbe la lumière à certaines longueurs d'onde, que le spectrophotomètre peut détecter.
L'instrument mesure à la fois l'absorption de la lumière et la transmission.
La valeur d'absorbance vous indique la quantité de lumière que l'échantillon absorbe.
La valeur de transmission montre combien de lumière passe.
Voici un tableau montrant comment Absorbance et transmission se rapportent :
| transmission (%) | absorbance (a) |
|---|---|
| 100 | 0 |
| 50 | 0.301 |
| 10 | 1.0 |
| 5 | 1.301 |
| 1 | 2.0 |
| 0.1 | 3.0 |
Vous utilisez la spectrophotométrie et la spectroscopie dans de nombreux domaines scientifiques. Dans la spectroscopie UV-Vis, vous pouvez étudier comment les chromophores dans un échantillon absorbent la lumière à différentes longueurs d'onde. Cela vous aide à analyser la composition chimique et la progression de la réaction. La spectrophotométrie vous permet Mesurer des choses comme l'activité enzymatique, la qualité des aliments et même les marqueurs de la maladie dans le sang. En classe, en utilisant la spectrophotométrie UV-Vis relie ce que vous apprenez en théorie à de vraies expériences . Vous obtenez une pratique pratique et voyez comment l'absorption de la lumière change avec différents échantillons.
La spectroscopie et la spectrophotométrie rendent la science plus interactive.
Vous apprenez à utiliser de vrais instruments et à comprendre les données.
Ces compétences vous aident en chimie, en biologie et en science matérielle.
Vous avez besoin d'une forte source de lumière pour démarrer votre expérience UV-vis. La source lumineuse brille dans votre échantillon et couvre un large spectre. Différentes lampes fonctionnent pour différentes parties du spectre. Par exemple, Les lampes de deutérium couvrent la gamme UV de 190 à 370 nm , tandis que les lampes halogènes en tungstène fonctionnent pour le spectre visible de 320 à 1100 nm. Les lampes flash xénon et les LED peuvent couvrir les gammes UV et visibles. Le monochromateur divise la lumière en une bande étroite, vous pouvez donc choisir la longueur d'onde exacte que vous souhaitez étudier dans le spectre. Le La largeur de fente du monochromateur contrôle à quel point votre spectre apparaît net . Des fentes étroites vous donnent une meilleure résolution, mais moins de lumière. Des fentes plus larges laissent entrer plus de lumière, mais le spectre devient moins clair. Voici un tableau montrant quelques détails techniques courants:
| des composants / données numériques | Spécification |
|---|---|
| Sources légères | Deuterium: UV (190–370 nm), durée de vie ~ 100 heures |
| Halogène en tungstène: vis (320–1100 nm), durée de vie ~ 3000 h | |
| Lampes flash xénon: UV / vis (190–1100 nm), durée de vie ~ 3000 h | |
| LED: Spectre stable, vie> 100 000 heures | |
| Monochromators | Utilisez des prismes ou des réseaux de diffraction pour diviser les longueurs d'onde légères |
| Résolution des contrôles de largeur de fente | |
| Bande passante spectrale | Fixe ou variable (par exemple, 0,5 à 5 nm) |
Astuce: Pour les études UV-Vis, vérifiez toujours le type de lampe et la largeur de fente pour répondre à vos besoins de spectre.
Vous placez votre échantillon dans une cuvette, qui se trouve dans le porte-échantillon. La cuvette doit être claire pour laisser passer le spectre. Pour les mesures UV-vis, Les cuvettes de quartz fonctionnent mieux car elles permettent de faire passer les UV . Les cuvettes en plastique ou en verre peuvent bloquer les parties du spectre UV, ce qui peut modifier vos résultats. La longueur du chemin de la cuvette affecte la quantité de lumière que l'échantillon absorbe. Les longueurs de trajet plus longues augmentent l'absorbance, ce qui aide lorsque vous avez un échantillon de faible concentration. Les longueurs de chemin plus courtes aident lorsque votre échantillon est très concentré. Vous devez également remplir la cuvette au bon niveau, de sorte que le spectre passe par l'ensemble de l'échantillon. Si vous utilisez la mauvaise cuvette ou le remplissez de manière incorrecte, vos lectures de spectrophotomètre ne seront pas exactes.
Une fois le spectre qui passe par votre échantillon, le détecteur mesure la quantité de lumière. Les spectrophotomètres modernes utilisent des détecteurs sensibles qui peuvent ramasser de minuscules changements dans le spectre. Ces détecteurs fonctionnent rapidement et peuvent mesurer La petite absorbance change, même aussi faible que 0,0001 . L'affichage montre vos résultats, souvent comme un graphique du spectre ou comme des valeurs d'absorbance à différentes longueurs d'onde. Vous pouvez voir des pics dans le spectre qui vous parlent de l'échantillon. Des détecteurs et des affichages de haute qualité vous aident à obtenir des données UV-vis fiables. Lorsque vous vous concentrez sur la compréhension de l'instrumentation, vous pouvez faire confiance à vos résultats et repérer rapidement tous les problèmes.
Avant de commencer une expérience, vous devez suivre les règles de sécurité. Ces règles vous protègent et vous aident à obtenir des résultats fiables. Portez toujours des lunettes de sécurité et des gants lors de la manipulation des produits chimiques ou des échantillons. Gardez votre espace de travail propre et sec. Ne mangez pas ou ne buvez jamais près du spectrophotomètre.
Astuce: manipulez les cuvettes par les côtés givrés pour éviter les empreintes digitales sur les surfaces claires. Les empreintes digitales peuvent changer vos lectures.
Un aperçu des données de laboratoire montre pourquoi la sécurité et la bonne technique sont importantes. Dans les tests du College of American Pathologists, jusqu'à 22% de variation des lectures d'absorbance est apparue entre les laboratoires. Même après avoir retiré les laboratoires avec un équipement défectueux, la variation est restée à 15%. Ce tableau montre les nombres:
| Année | Nombre de laboratoires | coefficient maximal de variation (CV) dans | les notes d' absorbance (%) |
|---|---|---|---|
| 1973 | 132 | 22 | Test initial montrant une grande variabilité |
| 1974 | 135 | 15 | Après avoir exclu 24 laboratoires avec> 1% de lumière parasite |
| 1974 | 24 (laboratoires exclus) | Jusqu'à 11 (CV en transmittance) | Des laboratoires avec> 1% de lumière parasite provoquant des erreurs |
Ces résultats montrent que la sécurité, l'étalonnage approprié et la manipulation prudente réduisent les erreurs. Suivez toujours le guide de votre enseignant ou de votre superviseur de laboratoire pour une utilisation de spectrophotomètre en toute sécurité.
Vous devez configurer et calibrer le spectrophotomètre avant de mesurer quoi que ce soit. Cette étape garantit que vos lectures sont correctes. Suivez ce guide pour la configuration et l'étalonnage:
Allumez le spectrophotomètre et laissez-le Réchauffez-vous pendant au moins 45 minutes . Cela aide l'instrument à se stabiliser.
Choisissez la longueur d'onde dont vous avez besoin pour votre expérience. Vérifiez le manuel du réglage recommandé, tel que 465 nm.
Placer un blanc (une cuvette remplie de solvant ou de tampon) dans le support d'échantillon. Fermez le couvercle et définissez l'écran sur zéro. Cette étape supprime les signaux d'arrière-plan.
Insérer un Norme d'étalonnage qui correspond au type d'échantillon que vous testerez. Enregistrez la lecture.
Comparez votre lecture à la valeur du certificat d'étalonnage. Si les chiffres ne correspondent pas, vérifiez la tolérance de l'instrument et l'incertitude de la norme.
Si vous trouvez un problème, testez la norme sur un autre spectrophotomètre pour voir si le problème est avec l'instrument ou la norme.
Répéter l'étalonnage au moins toutes les huit heures ou lorsque la température ambiante change de plus de 5 ° C.
Remarque: Gardez le spectrophotomètre à l'écart des changements directs du soleil et de la température. Des conditions stables vous aident à obtenir des résultats précis.
Une bonne préparation des échantillons est essentielle pour obtenir des données fiables. Vous devez suivre un guide pour chaque étape pour éviter les erreurs. Voici les meilleures pratiques pour la préparation des échantillons:
Récupérez votre échantillon à l'aide d'outils et de conteneurs propres.
Stockez les échantillons à la bonne température et protégez-les de la lumière si nécessaire.
Homogénéiser l'échantillon donc il est uniforme. Cette étape réduit les erreurs.
Filtre ou centrifuger l'échantillon pour éliminer les particules qui pourraient bloquer la lumière.
Ajustez la concentration afin qu'elle s'inscrit dans la plage de détection du spectrophotomètre.
Réglez le pH si votre expérience l'exige.
Utilisez des blancs et des doublons pour vérifier la cohérence.
Notez chaque étape de votre cahier de laboratoire.
Astuce: utilisez toujours le même type de cuvette pour tous les échantillons et blancs. Cela maintient vos résultats cohérents.
Les chercheurs ont constaté qu'une préparation minutieuse, comme le filtrage et l'ajustement de la concentration, conduit à des résultats plus précis et reproductibles. Les étapes de contrôle de la qualité, comme utiliser des blancs et des doublons, vous aident à repérer les problèmes tôt.
Vous êtes maintenant prêt à mesurer votre échantillon. Ce guide vous aidera à obtenir les meilleurs résultats:
Essuyez la cuvette avec un tissu sans peluche pour enlever la poussière ou les empreintes digitales.
Placer la cuvette dans le support avec les côtés transparents face au chemin léger.
Fermez le couvercle pour bloquer l'extérieur de la lumière.
Sélectionnez la bonne longueur d'onde pour votre test.
Appuyez sur le bouton 'read ' ou 'Mesurer '.
Attendez que l'écran affiche une valeur d'absorbance stable.
Retirez la cuvette et répétez pour chaque échantillon.
Pour améliorer la précision, utilisez toujours le Même spectrophotomètre pour toutes les mesures de votre expérience. Choisissez un blanc qui correspond au solvant de votre échantillon. Gardez les concentrations d'échantillons dans la gamme linéaire de la loi sur la bière-lame. Si votre échantillon est trop concentré, diluez-le et mesurez à nouveau. Pour des échantillons spéciaux, vous pouvez utiliser des agents de correspondance d'indice de réfraction ou des cuvettes de longueur de trajet courtes.
L'enregistrement précis des données est aussi important que l'expérience elle-même. Notez chaque lecture de votre cahier de laboratoire ou entrez-le dans une feuille de calcul. Enregistrez la date, l'heure, le nom de l'exemple, la longueur d'onde et la valeur d'absorbance. Si vous répétez une mesure, notez cela également.
Utilisez l'analyse des erreurs pour vérifier les erreurs.
Comparez vos résultats avec les analyses précédentes à l'aide des graphiques de contrôle.
Utilisez une analyse de régression si vous souhaitez prédire les concentrations de l'absorbance.
Gardez tous les enregistrements d'étalonnage et de validation pour une référence future.
Astuce: Vérifiez vos entrées avant de terminer. Des données précises vous aident à repérer les tendances et soutiennent vos conclusions.
Des méthodes statistiques comme l'ANOVA et les graphiques de contrôle montrent qu'un enregistrement minutieux de données conduit à de meilleurs résultats plus fiables. Les bons enregistrements vous aident également à comparer votre travail avec les autres et à améliorer votre technique au fil du temps.
En suivant ce guide, vous maîtriserez les bases de l'utilisation du spectrophotomètre. Une préparation minutieuse, une configuration, une mesure et un enregistrement de données vous aident à tirer le meilleur parti de chaque expérience.
Vous utilisez l'absorbance pour mesurer la quantité de lumière que votre échantillon prélève à une certaine longueur d'onde. Lorsque vous brillez la lumière à travers une solution, une lumière passe et certaines sont absorbées. Le spectrophotomètre vous donne un nombre appelé absorbance. Ce nombre vous indique la quantité de lumière que votre échantillon absorbe. L'absorbance est un élément clé de l'analyse quantitative en science.
La relation entre la transmission et l'absorbance n'est pas linéaire. À mesure que la transmission baisse, l'absorbance augmente rapidement. Vous pouvez voir cela dans le Tableau ci-dessous : Absorbance de
| transmission (T) | (A) |
|---|---|
| 10% (0,1) | 1 od |
| 1% (0,01) | 2 od |
| 0,1% (0,001) | 3 od |
Vous calculez l'absorbance à l'aide de la formule:
A = log₁₀ (i₀ / i)
Ici, je suis la lumière avant l'échantillon, et je suis la lumière après l'échantillon. Cette méthode vous donne une mesure quantitative de la quantité de lumière que votre échantillon absorbe.
La loi sur la bière-Lambert relie l'absorbance à la concentration. Vous utilisez cette loi pour découvrir la quantité de substance dans votre échantillon. La formule est:
a = ε × c × p
a est l'absorbance, ε est l'absorptivité molaire, C est la concentration et p est la longueur du chemin de la cuvette. Cette loi vous aide à effectuer un travail quantitatif en laboratoire.
Vous pouvez utiliser la loi sur la bière-Lambert pour de nombreuses substances. Par exemple, vous pouvez mesurer le Concentration de bilirubine en vérifiant l'absorbance à 454 nm . Chaque composé absorbe la lumière à sa propre longueur d'onde spéciale. Cela fait de la loi sur la bière-Lambert un outil puissant pour l'analyse quantitative.
Astuce: Gardez toujours la longueur du chemin et la longueur d'onde de la même manière pour tous vos échantillons. Cela maintient vos lectures d'absorbance précises.
Vous pouvez calculer la concentration en mesurant l'absorbance et en utilisant la loi sur la bière-Lambert. Tout d'abord, préparez un ensemble de normes avec des concentrations connues. Mesurer leurs valeurs d'absorbance. Tracez un graphique de l'absorbance en fonction de la concentration. Ce graphique vous aide à trouver la concentration d'échantillons inconnus.
Préparez vos solutions avec soin à l'aide de pipettes et équilibres calibrés.
Mesurez l'absorbance pour chaque échantillon standard et inconnu.
Appliquer des facteurs de correction si nécessaire, comme pour la longueur du chemin ou la dérive de l'instrument.
Les chercheurs ont montré que l'utilisation de facteurs de correction améliore la précision. Dans une étude, les scientifiques ont préparé des solutions d'acétone et de N-méthyl-acétamide avec des concentrations connues et inconnues. Ils ont constaté qu'avec des corrections appropriées, leurs résultats de concentration correspondaient à la loi sur la bière-Lambert dans les 20% . Sans corrections, les erreurs pourraient atteindre 2,5 fois la valeur réelle. Cela montre pourquoi une technique minutieuse est importante pour les résultats quantitatifs.
N'oubliez pas: de bons enregistrements et des mesures minutieuses vous aident à obtenir des données de concentration fiables à chaque fois.
Lorsque vous utilisez la spectroscopie UV-Vis, vous devez choisir le droit longueur d'onde pour votre expérience . Le meilleur choix est la longueur d'onde où votre échantillon montre le Absorbance la plus élevée, appelée Lambda Max . Cela vous donne les résultats les plus sensibles dans la spectrophotométrie UV-vis. Si une autre substance de votre échantillon absorbe à la même longueur d'onde, vous devez choisir une longueur d'onde différente avec une absorbance élevée mais aucune interférence. Vous devez également penser au solvant, au pH de l'échantillon et à la température car ceux-ci peuvent changer le spectre.
Vous pouvez voir comment différents solvants bloquent la lumière à certaines longueurs d'onde dans le graphique ci-dessous. Par exemple, L'eau permet aux UV-Vis de lumière jusqu'à 180 nm, tandis que l'acétone bloque la lumière en dessous de 329 nm.
Lorsque vous configurez votre expérience de spectrophotométrie UV-Vis, assurez-vous toujours que votre lecture d'absorbance est beaucoup plus élevée que le bruit de l'instrument. Cela vous aide à obtenir des résultats précis de votre spectre.
Lambda Max est le point sur le spectre où votre échantillon absorbe le plus de lumière. Dans la spectroscopie UV-Vis, cette valeur vous aide à identifier le type de molécule dont vous avez. Par exemple, les groupes carbonyle montrent souvent un pic entre 270 et 300 nm , tandis que les anneaux aromatiques absorbent près de 250 à 280 nm. La position et la hauteur du pic d'absorbance vous indiquent la structure de la molécule et les propriétés électroniques.
Les scientifiques utilisent de grands ensembles de données pour vérifier la fiabilité des valeurs Lambda Max. Ils regardent la moyenne, la médiane et la propagation de ces valeurs pour de nombreux composés. La plupart des composés ont des valeurs de Lambda Max qui se situent dans une plage étroite, ce qui signifie que les données sont stables et utiles pour l'enseignement et la recherche. Lorsque vous comparez les spectres expérimentaux et prédits par ordinateur, vous voyez Environ 75% se chevauchent , montrant que Lambda Max est une caractéristique forte et fiable dans la spectrophotométrie UV-Vis.
Vous trouverez de nombreuses applications pour la spectroscopie UV-Vis dans les laboratoires des étudiants. Les enseignants utilisent la spectrophotométrie UV-Vis pour vous aider à en savoir plus sur l'absorbance, l'analyse du spectre et les calculs de concentration. Dans une expérience commune, vous mesurez la quantité d'aspirine dans une tablette. Les étudiants créent une courbe d'étalonnage en utilisant neuf normes et une blanc, couvrant une plage de 0,00 à 0,48 mm. La plupart des étudiants atteignent un R⊃2 élevé; valeur (≥ 0,995), ce qui signifie que leur courbe d'étalonnage est très précise.
| du paramètre / plage | Valeur | Description / signification |
|---|---|---|
| Nombre de normes d'étalonnage | 9 | Les étudiants utilisent 9 normes et 1 blanc pour l'étalonnage dans l'analyse de l'aspirine. |
| Coefficient de détermination (R⊃2;) | ≥ 0,995 | Montre une forte linéarité dans les courbes d'étalonnage. |
| Pourcentage de différence de quantification de l'aspirine | 1,1% - 35,3% | Éventail des résultats des étudiants par rapport au contenu d'aspirine étiqueté. |
| Compétence LS5 Valeurs moyennes (groupe # 2) | ≥ 4,30 (ET ≤ 0,82) | Indique de solides compétences des élèves après une pratique pratique. |
Vous remarquerez peut-être une certaine variation des résultats, mais la pratique répétée avec la spectrophotométrie UV-vis améliore vos compétences. Les enseignants utilisent souvent des activités pratiques engageantes pour vous aider à maîtriser les calculs de lecture et d'absorbance du spectre. Ces applications de spectrophotométrie rendent la science plus interactive et vous aident à connecter la théorie à de vraies expériences. Lorsque vous participez à des activités de laboratoire pratiques, vous renforcez la confiance et apprenez à utiliser la spectroscopie UV-Vis pour de nombreuses applications de spectrophotométrie en chimie, biologie et sciences de l'environnement.
Lorsque vous terminez votre mesure, vous voyez des nombres et parfois un graphique sur l'affichage du spectrophotomètre. Vous devez savoir ce que ces résultats signifient. Le numéro principal que vous recherchez est l'absorbance. Cette valeur vous indique la quantité de lumière que votre échantillon a absorbé à une certaine longueur d'onde. Si vous voyez un graphique, l'axe y montre l'absorbance et l'axe x montre une longueur d'onde.
Pour donner un sens à vos données, suivez ces étapes:
Vérifiez que vos valeurs d'absorbance se situent dans la plage attendue. La plupart des spectrophotomètres fonctionnent mieux lorsque l'absorbance se situe entre 0,1 et 1,0.
Recherchez une courbe ou une ligne lisse sur votre graphique. Des sauts ou des gouttes soudains peuvent signifier qu'il y a un problème avec votre échantillon ou votre instrument.
Comparez vos résultats à votre blanc et à vos normes. Cela vous aide à voir si votre échantillon se comporte comme prévu.
Conseil: Des études de validation montrent que vous pouvez faire confiance à vos résultats lorsque vous vérifiez la précision, la précision et la linéarité. Les scientifiques testent plusieurs concentrations et répétent les mesures sur plusieurs jours pour s'assurer que le spectrophotomètre donne des données fiables. Ils utilisent des graphiques et une analyse de régression pour vérifier si les valeurs d'absorbance correspondent au modèle attendu.
Vous voyez souvent un ou plusieurs pics sur votre graphique de spectrophotomètre. Chaque pic montre où votre échantillon absorbe le plus de lumière. Le point le plus élevé d'un pic est appelé l'apex. Vous utilisez ces pics pour en savoir plus sur les produits chimiques de votre échantillon.
Voici comment vous pouvez identifier et analyser les pics:
Trouver le Maxima locale sur votre graphique. Ce sont les points les plus élevés au-dessus de la ligne de base.
Marquez le début et la fin de chaque pic. Vous pouvez le faire en recherchant où la courbe monte et redescende.
Mesurez la hauteur et la zone de chaque pic. La zone sous le pic vous indique la quantité de substance présente.
Comparez la position du pic (longueur d'onde) aux valeurs connues. Cela vous aide à identifier le produit chimique.
L'identification de pointe utilise à la fois la hauteur et la zone pour vous donner une image claire. Les scientifiques utilisent des algorithmes pour trouver le début, l'apex et la fin de chaque pic, même lorsque les données sont bruyantes. La zone sous le pic donne une bonne mesure de la part de l'analyte dans votre échantillon. Vous pouvez utiliser ces nombres pour comparer différents échantillons ou pour vérifier la pureté.
Remarque: le L'intensité maximale d'un pic et de la surface totale vous aide à détecter et à attribuer correctement les pics, même dans des mélanges complexes.
Parfois, vos résultats ne semblent pas corrects. Vous pourriez voir des pics étranges, une faible absorbance ou des données bruyantes. Vous pouvez résoudre de nombreux problèmes en vérifiant quelques points clés.
Assurez-vous que vos cuvettes sont propres et exemptes de rayures.
Vérifiez que vous avez utilisé le blanc correct et qu'il correspond à votre échantillon de solvant.
Confirmez que le spectrophotomètre est calibré et réchauffé.
Regardez votre échantillon pour les bulles ou les particules qui pourraient bloquer la lumière.
Vous pouvez utiliser des statistiques pour aider à trouver des problèmes. Par exemple, mesurez plusieurs fois l'absorbance de votre blanc et calculez l'écart type. Si vos lectures vierges varient beaucoup, votre instrument peut nécessiter une maintenance. Le La limite de détection vous indique le plus petit signal en qui vous pouvez faire confiance. Vous le trouvez en multipliant l'écart type du blanc par trois et en divisant par la pente de votre courbe d'étalonnage. Si l'absorbance de votre échantillon est inférieure à cette limite, vous n'aurez peut-être pas assez de substance pour mesurer.
| Problème | de cause possible | Solution |
|---|---|---|
| Base de base bruyante | Cuvette sale, bulles | Nettoyer la cuvette, retirer les bulles |
| Faible absorbance | Échantillon trop dilué | Augmentation de la concentration |
| Des pics inattendus | Contamination, mauvais blanc | Utilisez un échantillon frais et vide |
| Mauvaise linéarité | Erreur d'étalonnage | Recalibrer |
N'oubliez pas: un bon dépannage utilise à la fois une observation minutieuse et des statistiques simples. La vérification de l'écart-type et de la limite de détection vous aide à repérer les erreurs et à améliorer vos résultats.
Vous créez de fortes compétences en laboratoire en suivant chaque étape de la spectrophotométrie. L'enseignement commence par une préparation et un étalonnage soigneux. Vous utilisez le BEAR-LAMBERT Loi pour relier l'absorbance et la concentration, ce qui vous aide à obtenir des résultats précis. L'enseignement signifie également vérifier vos données avec Graphiques et statistiques , vous voyez donc les tendances et les erreurs de spot. Lorsque vous pratiquez l'enseignement de ces étapes, vous apprenez comment les changements de concentration affectent vos résultats. L'enseignement de la spectrophotométrie vous donne confiance et vous prépare à un travail scientifique plus avancé.
Tout d'abord, vérifiez l'alimentation et les connexions. Assurez-vous que le couvercle est fermé. Si l'erreur reste, lisez le manuel pour le dépannage des étapes. Vous pouvez également demander de l'aide à votre professeur ou à votre laboratoire.
Non, vous devez faire correspondre le blanc au solvant de votre échantillon. Si votre échantillon utilise un tampon ou un alcool, utilisez le même liquide que votre blanc. Cela maintient vos résultats précis.
L'étalonnage établit une base de référence pour vos lectures. Vous supprimez les signaux d'arrière-plan et corrigez la dérive des instruments. Cette étape vous aide à obtenir des résultats fiables et reproductibles à chaque fois.
Une cuvette rayée ou sale disperse la lumière. Cela peut provoquer de fausses lectures d'absorbance. Nettoyez toujours vos cuvettes et vérifiez les rayures avant de les utiliser.
